Daphnia magna immobilizációs teszt vízmintákhoz (felszíni és felszín alatti víz, csurgalék víz és szennyvíz)

Daphnia magna immobilizációs teszt vízmintákhoz (felszíni és felszín alatti víz, csurgalék víz és szennyvíz)

Szerző: 
BME-ABÉT, Nagy Zsuzsanna

A Daphnia magna akár 5 mm-re is megnőhet. A Daphniák szűznemzéssel szaporodnak, egy nőstény általában egyszerre 4–10 ivadéknak ad életet (az utódok a kedvező időszakban mind nőstények). Az embriók fejlődése az anyaállat testében akár mikroszkóp nélkül is megfigyelhető. A fiatal nőstények négy napos koruktól már minden harmadik napon tovább szaporodnak, körülbelül 40 napos életükben akár 25 alkalommal. Ha kedvezőtlen körülmények közé kerülnek az állatok (alacsony hőmérséklet, kevés táplálék), a petékből hímek is kifejlődnek, és a nőstények által rakott petéket megtermékenyítik, ezek az úgynevezett tartós peték (ephibiumok), amelyek a kedvezőtlen körülményeknek ellenállnak. A petéket rakó nőstények könnyen megkülönböztethetők a szűznemzéssel szaporodó, élőket szülő társaiktól, mivel a fejlődő ephibium fekete pontként jól látható az állat hátsó végénél. Amikor a környezeti feltételek megint ideálissá válnak, a petéket rakó generáció átvált az elevenszülésre és az új ivadékok már mind nőstények lesznek. A hím populáció kihal egészen addig, amíg az időjárási és táplálkozási feltételek romlani kezdenek.

A teszt során mozgásképtelenné vált állatok számát követve a vegyi anyagok és környezeti minták toxikus hatása vizsgálható.

A teszt kivitelezése:

A tesztre alkalmas egyedek kiválasztása

20–30 darab több mint 7 napos, testükben embriókat hordozó anyaállatot különítünk el nagy lyukméretű osztályozóháló segítségével. A költőtasakból kiszabadult, 24 órás állatok mérete 1–2 mm közötti, az ilyen korú állatokat a nagyobb, anyaállatok közül kisebb lyukméretű osztályozóháló segítségével válogatjuk ki.

A vizsgálat menete:

50-50 ml folyadékmintát főzőpoharakba mérjük, három párhuzamossal dolgozunk. Egy kis planktonhálóból formázott kanállal kiválogatunk 10-10 db 24 órás állatot. Az inkubációs idő alatt 24 óránként szabad szemmel és/vagy sztereomikroszkóppal megszámoljuk minden főzőpohárban a mozgásképes állatok számát.

A mérés kiértékelése:

A szaporodás-gátlás mértékének kiszámítása az ökotoxikológiában szokásos módon történik az alábbi egyenlet segítségével:

H (%) = 100*((Nk-Nminta)/Nk)

H – szaporodás gátlás (%)
Nk – kontroll tenyészet sejtszáma (db/ml)
Nminta – mérendő mintát tartalmazó tenyészet sejtszáma (db/ml)

A teszt eredményeit akkor fogadjuk el, ha a kontrollban az állatok több mint 80%-a mozgásképes maradt.

Forrás: 

OECD Guideline for testing of chemicals 202, Daphnia sp., Acute Immobilisation Test and Reproduction Test, online: http://www.oecd.org/chemicalsafety/risk-assessment/1948249.pdf